CMFDA 是一种可用于检测细胞运动和定位的绿色荧光染料。该染料信号较稳定，可与其它荧光标记染料很好的区分。且本染料对细胞低毒，操作方便，只需移去培养基，避光孵育 30 分钟，即可成像观察。另外，由于荧光信号可以稳定存在至少 72 小时，因此基本上可以完成对 3-6 代细胞的示踪分析。

产品参数：

激发/发射：492/517nm

运输条件：常温

储存条件：20℃，避光

分子式：C25H17O7CL

分子量：464.85

CAS号：136832-63-8

实验步骤:

注意：根据不同的细胞或组织类型，以下实验操作步骤指南可能需要做相应的调整。

说明：

①根据不同的实验需求选择合适的染色液浓度，建议在正式实验之前做了一个倍比稀释的最佳浓度测试。

②通常情况下，长时间染色（超过 3 天）使用染色液浓度为 5~25 µM,短时间染色使用低浓度的染色液浓度 0.5~5 µM，比如细胞活性分析实验。

③为了维持正常的细胞生理形态，避免给细胞带来不必要的损伤，在达到染色效果的目的的情况下，尽可能地使用低浓度的染色液。

1. 使用无水 DMSO 将 CMFDA 固体溶解，配制成 10 mM 的储存液。使用无血清的培养基将储存液稀释至 0.5~25 μM 的工作液。在使用之前将工作液置于 37℃进行预热。

2. 根据不同的细胞类型在不同的细胞培养条件下孵育 15~45 分钟。对于悬浮细胞，离心弃上清，收集细胞沉淀。用预热的染色液重悬细胞；对于贴壁细胞，当细胞生长到合适的细胞密度，移除上清培养液，加入预热的染色液。

3. 移除染色液，加入新鲜预热的细胞培养基，37℃孵育 30 分钟。

4. 对于悬浮细胞，吸取 5 μl 左右染色后的细胞滴至载玻片上，加盖盖玻片，置于荧光显微镜下观察；对于贴壁细胞，直接观察即可。

（可选）如需固定细胞，可先跳过步骤 4，完成固定步骤后再进行观察准备。

5. 使用 PBS 清洗细胞。

6. 使用含有 3.7%多聚甲醛的 PBS 固定细胞，室温孵育 15 分钟。

7. 使用 PBS 清洗细胞。

8. 如果需要可对细胞膜进行透化处理。当细胞需要进行抗体标记时，细胞膜的透化处理是有必要的，便于促进抗原进入细胞。可以使用冰冷丙酮处理细胞 10 分钟，可以提供细胞的渗透性。

案例分析：

注意事项:

为避免反复冻融，建议适当分装。

对于微量的液体，每次使用前请先高速离心数秒，使液体充分沉降到管底。

荧光染料不可避免的存在淬灭问题，请存放及操作时尽量注意避光，以减缓荧光的淬灭。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。