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南京知凡生物技术有限公司
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    支原体清除系列
    支原体清除
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    黑胶虫污染清除
    黑胶虫清除
    黑胶虫预防
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    耐药菌处理
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    真菌污染处理
    霉菌清除剂
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    支原体污染检测
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    细胞房除菌剂
    培养箱除菌剂
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人肺腺癌细胞提取

作者:小刀浏览数:6
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样本处理:
















































1、原代细胞保护剂(ZF706-01)、双抗和 PBS按照比例进行配制,用来清洗标本。
2、取回来的标本用吸枪吸走培养基,吸完之后用配好的原代细胞保护剂(ZF706-01)、双抗的 PBS 清洗两次,洗掉血水,剔除正常组织及间质,留下较纯的肿瘤组织。
3、洗完之后,在冰块上放上 10cm 的培养皿,将洗好的组织加入 PBS 倒入其中。



















































4、原代制作:10cm 培养皿中的组织用镊子夹入另外一个干净的 10cm 培养皿中 (如果有 PBS,用刀片切标本会滑,切不动)使用双面刀片切碎(泥状),Hank’s平衡盐溶液稀释胶原酶Ⅰ型(ZF301-02), 透明质酸酶 和 Dnase Ⅰ 型 中加入切碎的组织中,重悬组织,吸入 15ml 的离心管中。37°孵箱中旋转孵育 40-60min,时间视细胞团块大小而定。
5、孵育之后加入 2-3 倍体积的培养基(DMEM +20%胎牛血清优级+双抗+原代细胞保护剂(ZF706-01))终止消化,将 70um 的细胞筛放在 50mL 的离心管上,用 1ml 的枪头将细胞悬液吸起过滤,将滤 过的细胞悬液分装到 15ml 离心管中,950rpm/15min(D/R=10)
6、向 15ml 离心管中加入 1ml percoll细胞分离液重悬细胞后,再加入剩下 3ml percoll细胞分离液,再次吹匀细胞悬液;向细胞混合液中缓慢持续加入 4-5ml PBS(离液 面较近沿管壁缓慢按住枪头加,3min 左右加完 1ml),共加入 4ml PBS。800g 离心 20min,缓慢升降速(D/R=10).



















































7、若标本颜色乳白,红细胞较少,则不进行裂红,若标本较红,血细胞较多, 则进行裂红,过滤过的水(4℃)配制 1X 裂红液(放置室温)。细胞离好后,弃上清,每管加入 1ml 裂红液,裂红 60-90s,不超过 2min,裂好 后立即加入 4ml PBS 终止,950rpm/15min。
8、弃上清,加入 4ml PBS,950rpm/15min.
9、弃上清,加入 4ml 完全培养基,950rpm/15min.
10、弃上清,用 1ml 全培养基重悬细胞,在 6 孔板中加入 1ml 培养基,加入细胞 悬液,放入 37°孵箱中培养。每天观察,隔天换液,5-8 天传代(视细胞情况)。

END


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