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南京知凡生物技术有限公司

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产品详情
DiD perchlorate(细胞膜红色荧光探针)
价格:
2100.00
规格: 25mg
品牌: ZoFtic
货号: CS322
产品详情

DiI、DiO、DiD 和 DiR 属于长链二烷基羰花青化合物,是一系列亲脂性的荧光染料,可用于细胞膜和其它脂溶性生物结构染色,是一类环境敏感型荧光染料。当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质,虽然在水中其荧光强度很弱)结合时,其荧光强度显著增强。这类染料具有很高的摩尔消光系数,极性依赖性的荧光和很短的激发寿命。

DiD 是 DiI 的衍生物,具有明显往红光迁移的激发和发射光谱,这一特性使其特别适合标记具显著自荧光效应的细胞或组织。DiD 可被 633nm 的氦-氖(He-Ne)激光所激发,呈红色荧光,在进入细胞膜之前荧光非常弱,当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,进入细胞后,染料在整个细胞膜上扩散,最佳浓度时可以使整个细胞染色。


产品参数:

激发/发射波长:645/665nm

运输条件:常温

储存条件:20℃,避光

分子式:C61H99ClN2O4

分子量:959.92

CAS号:127274-91-3

实验步骤

制备储存液

将固体染料溶于DMF或DMSO或乙醇配制为1 mM的储存液。配制好的储存液,在避光-20°C的条件下至少可以保存6个月。

悬浮细胞的染色

1 将细胞以 1 × 10^6/ml 的密度悬浮于无血清培养基中;

2 每 1ml 细胞悬液加入 5µl 细胞染色液,混匀;

3 37°C 孵育 1~20 分钟。不同类型的细胞孵育条件不一样,可参考表格 1。初始孵育时间可选择 20 分钟,然后再进行优化;

4 将孵育后的细胞悬液 37°C,1500rpm,离心 5 分钟;

5 弃去上清,用 37°C 的培养基轻轻悬浮细胞;

6 重复以上洗涤步骤(1.4 和 1.5)两次;

7 放置 10 分钟后测定荧光信号。

贴壁细胞的染色

1 放置干净的载玻片在培养皿内,让细胞爬片生长至合适浓度;

2 取出爬片,用吸水纸从边缘轻轻吸去多余的培养基,然后将爬片放置于湿盒内;

3 配制染色液:每 1ml 培养基加入 5µl 细胞染色液;

4 用移液器吸取 100µl 步骤 2.3 中配制好的染色液,从边角处加入爬片,轻轻摇动使所有染色液覆盖整个爬片;

5 将爬片置于 37°C 孵育,不同类型的细胞孵育的时间不尽相同(参考表 1);对于未在表中列出的细胞类型,建议孵育时间设为 20 分钟,然后再进行优化以获得均

一的染色效果;

6 吸去染色液,加入温育过的培养基孵育 10 分钟,重复此洗涤步骤三次。

案例分析:

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