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南京知凡生物技术有限公司

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产品详情
CellMaker Green CMFDA(细胞质示踪绿色荧光探针)
价格:
2200.00
规格: 1mg
品牌: ZoFtic
货号: CS318
产品详情

CMFDA 是一种可用于检测细胞运动和定位的绿色荧光染料。该染料信号较稳定,可与其它荧光标记染料很好的区分。且本染料对细胞低毒,操作方便,只需移去培养基,避光孵育 30 分钟,即可成像观察。另外,由于荧光信号可以稳定存在至少 72 小时,因此基本上可以完成对 3-6 代细胞的示踪分析。


产品参数:

激发/发射:492/517nm

运输条件:常温

储存条件:20℃,避光

分子式:C25H17O7CL

分子量:464.85

CAS号:136832-63-8

实验步骤:

注意:根据不同的细胞或组织类型,以下实验操作步骤指南可能需要做相应的调整。

说明:

①根据不同的实验需求选择合适的染色液浓度,建议在正式实验之前做了一个倍比稀释的最佳浓度测试。

②通常情况下,长时间染色(超过 3 天)使用染色液浓度为 5~25 µM,短时间染色使用低浓度的染色液浓度 0.5~5 µM,比如细胞活性分析实验。

③为了维持正常的细胞生理形态,避免给细胞带来不必要的损伤,在达到染色效果的目的的情况下,尽可能地使用低浓度的染色液。

1. 使用无水 DMSO 将 CMFDA 固体溶解,配制成 10 mM 的储存液。使用无血清的培养基将储存液稀释至 0.5~25 μM 的工作液。在使用之前将工作液置于 37℃进行预热。

2. 根据不同的细胞类型在不同的细胞培养条件下孵育 15~45 分钟。对于悬浮细胞,离心弃上清,收集细胞沉淀。用预热的染色液重悬细胞;对于贴壁细胞,当细胞生长到合适的细胞密度,移除上清培养液,加入预热的染色液。

3. 移除染色液,加入新鲜预热的细胞培养基,37℃孵育 30 分钟。

4. 对于悬浮细胞,吸取 5 μl 左右染色后的细胞滴至载玻片上,加盖盖玻片,置于荧光显微镜下观察;对于贴壁细胞,直接观察即可。

(可选)如需固定细胞,可先跳过步骤 4,完成固定步骤后再进行观察准备。

5. 使用 PBS 清洗细胞。

6. 使用含有 3.7%多聚甲醛的 PBS 固定细胞,室温孵育 15 分钟。

7. 使用 PBS 清洗细胞。

8. 如果需要可对细胞膜进行透化处理。当细胞需要进行抗体标记时,细胞膜的透化处理是有必要的,便于促进抗原进入细胞。可以使用冰冷丙酮处理细胞 10 分钟,可以提供细胞的渗透性。

案例分析:

注意事项:

为避免反复冻融,建议适当分装。

对于微量的液体,每次使用前请先高速离心数秒,使液体充分沉降到管底。

荧光染料不可避免的存在淬灭问题,请存放及操作时尽量注意避光,以减缓荧光的淬灭。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


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