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产品详情
CFDA SE(细胞增殖示踪荧光探针)
价格:
1600.00
规格: 25mg
品牌: ZoFtic
货号: CS315
产品详情

CFDA,SE 的英文全称为 Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester,是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞渗透性荧光染料,不仅可用于细胞增殖的体外实验,还可用于追踪细胞在体内的分裂增殖过程。CFDA,SE 可以通过细胞膜,进入细胞后可以被细胞内的酯酶(esterase)催化分解成 CFSE,CFSE 可以偶发性地、不可逆地和细胞内蛋白的赖氨酸残基或其它氨基酸发生结合反应,并标记这些蛋白。加入荧光探针CFDA 后大约 24 小时,即可充分标记细胞。被 CFDA,SE 标记的非分裂细胞的荧光信号非常稳定,荧光信号可稳定保持数月。CFSE 标记细胞的荧光信号非常均一,优于以前使用的其它细胞示踪荧光探针,例如 PKH26。且分裂后的子代细胞的荧光信号分配亦很均匀。由于 CFDA,SE 标记细胞的荧光非常均匀和稳定,每分裂一次子代细胞的荧光信号强度会减弱一半,这样通过流式细胞仪就可以检测出没有分裂的细胞,分裂一次的细胞(1/2 荧光信号强度),分裂两次的细胞(1/4 荧光信号强度),分裂三次的细胞(1/8 荧光信号强度)以及类似的其它分裂次数的细胞。

CFDA,SE 标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞分裂增殖检测,最常用于淋巴细胞的增殖检测,也可以用于成纤维细胞、NK 细胞等其它细胞的增殖检测,甚至还可以用于细菌增殖的检测。

本品为粉末状固体,如需长期储存,请置于-20℃干燥避光保存,有效期为 1 年。

使用前需溶于 DMSO 配制成储备液后保存备用。

产品参数:

化学名称: 5-(and-6)-Carboxyfluorescein Diacetate N-succinimidyl ester

分子式: C29H19NO11

分子量: 557.47

CAS 号: 150347-59-4

实验步骤:

注意:以下是活细胞染色的推荐步骤,可根据实际情况进行适当调整。

1. 离心收集细胞,调整细胞浓度为 1-5×105 个/管;

2. 用 500 µl CFDA,SE 工作液悬浮细胞,于室温或 37℃避光孵育 10-30 分钟;

3. 吸除染液,用 HBSS 或其他合适的缓冲液清洗细胞,用 500 µl 预热 HBSS 或培养液悬浮细胞;

4. 在 Ex/Em=490/520 nm 下用流式细胞仪(FL1 通道)或荧光显微镜观察细胞。

实验说明:

1. 制备标记储存液:将 CFDA,SE 粉末溶于适量 DMSO,使其浓度为 1~5 mM(推荐直接配制成 5 mM 的浓度,之后按实际需求考虑是否需要稀释,1 mg/ml 的 CFDA,

SE 溶液浓度相当于其摩尔浓度 1.8 mM)。

2. 标记细胞与检测:CFDA, SE 工作液的浓度需根据标记的细胞类型及时间长短适当调整优化。

建议短期标记工作液浓度:0.1 µM;

1~2 天时长的示踪标记,工作液浓度为:1~5 µM;

注意:标记的细胞呈绿色荧光,检测时的激发波长可以选择 488 nm,此时的发射波长为518 nm。使用流式细胞仪检测时可以采用 FL1 Detection Chanel。

案例分析:

注意事项:

CFDA,SE 配制成储存液后宜在一个月内使用完毕,最长请勿超过 2 个月。CFDA ,SE 易被水解,在水溶液中会很快变质,在使用过程中应尽量避免产品与水接触(标记细胞过程

中除外)。

CFDA,SE 溶剂在 4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内。可在 20~25℃水浴温育片刻至全部溶解后使用。

不同细胞其细胞内酯酶的活性不同,因此染色效果可能会有差异。

荧光染料不可避免的存在淬灭问题,请存放及操作时尽量注意避光,以减缓荧光的淬灭。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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