产品说明
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine，简称PS)只分布在细胞膜内侧，而在早期凋亡的细胞，PS由细胞膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36 kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与早期凋亡细胞翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。因此，利用上述性质，Annexin V成为检测早期细胞凋亡的最灵敏指标之一。
将Annexin V进行绿色荧光(EGFP)标记，以标记了的Annexin V-EGFP作为探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料，它不能透过具备完整细胞膜的正常细胞和早期凋亡细胞，但能够透过凋亡中晚期的细胞和坏死细胞的细胞膜而将细胞核染色，在特定激发光条件下呈现红色。将Annexin V-EGFP与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。在双变量流式细胞仪的散点图上，若横坐标表示Annexin V-EGFP信号，纵坐标表示PI信号，则左下象限(Annexin V-EGFP-/PI-)代表活细胞；右下象限(Annexin V-EGFP+/PI-)代表早期凋亡细胞；右上象限(Annexin V-EGFP +/PI+)代表凋亡晚期细胞和坏死细胞；左上象限(Annexin V-EGFP-/PI+)被认为是许可范围内的检测误差。
本试剂盒操作简便、灵敏度高、特异性强，适用于早期凋亡细胞的检测。与FITC相比，EGFP更加稳定，荧光更强且不易淬灭。
制品内容
产品组分 | NAP102-01 (50 rxn) | NAP102-02 (100 rxn) |
Annexin V-EGFP | 50 ul | 100 ul |
Propidium Iodide (PI) | 50 ul | 100 ul |
20 × Binding Buffer | 1.25 ml | 1.25 ml × 2 |
应用案例
用700 uM H2O2刺激小鼠原代胸腺淋巴细胞30 min，参照以上实验操作步骤，用流式细胞仪检测细胞凋亡，结果如下图所示。
