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南京知凡生物技术有限公司

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Western Blot

Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离细胞或组织样本中的蛋白,经转膜、封闭,目标蛋白与具有特异性的一抗结合后,再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗起反应,最后经底物显色,通过对曝光条带的位置和灰度分析从而获知目标蛋白在样本中的表达情况。由于该法具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,故广泛应用于分子生物学等领域,成为免疫学、微生物学及其他生命科学常用的一种研究方法。

技术优势:

  • 高分辨率的电泳技术:聚丙烯酰胺凝胶(polyacrylamide gel,PAGE)把分子筛作用和电荷效应结合在同一方法中,达到更高的灵敏度。

  • 特异敏感的抗原-抗体反应:抗原抗体的结合实质上是抗原表位与抗体超变区中抗原结合点之间的结合。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系,所以抗原与抗体的结合具有高度的特异性。

  • 1-5ng中等大小的靶蛋白:可检测到低至1~5ng(最低可到10~100pg)中等大小的靶蛋白。

实验流程:

 应用领域:

1、从蛋白混合物中检出目标蛋白;

2、定量或定性确定细胞或组织中蛋白的表达情况;

3、细胞核蛋白与细胞浆蛋白中目的蛋白的表达情况;

4、临床样本或科研实验样本中目的蛋白表达差异检测;

5、疾病患者与正常人、癌组织与癌旁组织间蛋白表达差异检测。

客户提供:

1、待检测的样品(蛋白、菌液、细胞系或者组织)

2、目的蛋白的相关信息

3、抗体相关信息(需提供一抗)

服务内容:

1、蛋白质抽提及样品准备

2、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)

3、蛋白质转膜

4、封闭及孵育

5、结果检测及分析

6、完整实验报告

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